《动物发育生物学实验》教学大纲
课程代码：（宋体五号）
课程负责人：邓凤姣
课程中文名称: 动物发育生物学实验
课程英文名称：Experiment of the animal developmental biology
课程类别 ：选修
课程学分数：3
课程学时数：72学时
授课对象： 四年级本科生
本课程的前导课程：动物学实验，遗传学实验，细胞生物学实验，生化实验和分子生物学实
一、教学目的
本实验主要以斑马鱼、泥鳅、小鼠为实验材料。实验从动物的生殖细胞发生到个体形成这一发育过程, 从形态、细胞、分子水平上进行综合实验。通过本实验课程的教学，使学生能从形态结构、细胞、组织、分子四个水平上综合了解动物生殖细胞和胚胎发育的演变过程。同时将科研研究思想贯穿其中，为学生进入科研阶段打下了一个良好的基础。
二、教学要求
要求学生掌握斑马鱼和小鼠生殖细胞的发育过程；泥鳅的人工授精；小鼠的超数排卵的技术。了解动物胚胎发育过程中不同时期细胞、组织、器官形成的特点；重点掌握分离斑马鱼受精卵与神经胚特异基因表达EST、 用组织和整体原位杂交方法检测特异蛋白在斑马鱼胚胎发育过程中定位等方法。内容从动物发育过程中的形态结构、细胞、组织、分子四个水平综合起来，并前后相关联。
三、教学学时分配和安排
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| 教学内容
| 学时
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第一部分
| 生殖细胞发育过程
一、斑马鱼和小鼠生殖细胞发育过程（冰冻切片术）
二、小鼠的超数排卵
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12
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第二部分
| 泥鳅的人工催青和人工授精
| 8
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第三部分
| 胚胎发育
一、泥鳅和胚胎发育过程的活体观察
二、mRNA差异显示法,分离斑马鱼胚胎发育过程中特异表达的EST
三、用组织原位杂交方法，检测斑马鱼胚胎发育过程中蛋白表达。
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52
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合计
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| 72
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实验整体安排为三部分
精子
生殖细胞发生过程 受精过程 受精卵 原肠胚 神经胚 个体
卵子
第一部分 第二部分 第三部分
第一部分 生殖细胞发育
（一） 生殖细胞发育过程
[目的要求] 通过本实验，掌握冰冻切片技术；了解哺乳动物和斑马鱼的精巢、卵巢结构及生殖细胞的发育过程。
[实验原理] 精巢、卵巢经切片、固定、染色后的标本，细胞保持生活时的结构。
[教学内容] 冰冻切片；卵母细胞中特殊结构的染色；观察斑马鱼和小鼠精巢、卵巢及生殖细胞发育过程。
[实验材料和用品] 小鼠，斑马鱼，染色液，冰冻切片机、显微镜。
附：多媒体演示猫精巢卵巢的发育过程（实验中空余时间进行）。
（二）小鼠的超数排卵
[目的要求] 小鼠的超数排卵是转基因技术、细胞核移植、嵌合体等实验中最基本的技术。通过本实验，掌握小鼠超数排卵原理和方法。
[实验原理] 促性腺激素，促进多个卵母细胞同步成熟。
[教学内容] 小鼠超数排卵，取卵。
[实验材料和用品] 小鼠、促性腺激素。体视显微镜，显微镜。
第二部分 泥鳅的受精
（一）泥鳅的人工催青和人工授精
[目的要求] 掌握泥鳅的人工催青和人工授精的技术。
[实验原理] 注射促性腺激素加速生殖细胞的成熟
[教学内容] 泥鳅的人工催青和人工授精
[实验材料和用品] 雌、雄泥鳅，体视显微镜，显微镜。
第三部分：胚胎发育
（一）泥鳅胚胎发育过程的活体观察
[目的要求] 通过连续跟踪观察泥鳅受精卵经历卵裂、原肠、神经胚等期的发育过程中形态
动态变化的特点，了解脊椎动物的早期胚胎发育过程。
[实验原理] 用体视显微镜可对受精卵发育过程中形态的变化进行连续的动态观察。
[教学内容] 用体视显微镜连续跟踪观察泥鳅从受精卵到幼鱼的早期胚胎发育过程。
[实验材料和用品] 前面实验得到泥鳅受精卵。体视显微镜。
附：两栖类固定胚胎和发育模型观察，（实验中空余时间进行）。
（二）mRNA差异显示法分离斑马鱼胚胎发育过程中特异基因表达的EST
[目的要求] 掌握mRNA差异显示法分离特异表达基因片段的技术和方法。
[实验原理] 利用胚胎发育不同时期一些特异表达基因的特点, 来分离胚胎发育过程中特异基因表达的EST.
[教学内容] mRNA制备，体外逆转，cDNA扩增，聚丙酰胺凝胶电泳。
[实验材料和用品] 斑马鱼受精卵，原肠胚， PCR仪, 电泳仪等。
（三）胚胎发育过程中蛋白质原位杂交
[目的要求] 掌握石蜡切片技术，免疫组织化学技术，组织学染色技术。
[实验原理]发育过程中形成不同的组织或细胞是特异基因表达的结果，通过免疫组化检测一种特异基因产物在胚胎发育过程中的定位。
[教学内容] 斑马鱼神经胚，幼鱼的固定、包埋、切片；免疫组化。
[实验材料和用品] 斑马鱼神经胚，幼鱼，烘箱，体视显微镜，显微镜，切片机。
四、教材与参考书
教 材：自编“动物发育生物学实验”作者： 邓凤姣等。
五、考核方式
预习实验原理、考勤、卫生、实验记录、实验操作、实验报告、实验结果等综合考核。
