《微生物学实验》课程教学大纲
课程代码：0700158
课程负责人：谢志雄
课程中文名称:微生物学实验
课程英文名称：Experiment of Microbiology
课程类别：必修
课程学分数：1.5
课程学时数：54
授课对象：生命科学学院2年级本科生、药学院、医学院本科生。
本课程的前导课程：生物学实验
一、 教学目的
微生物学实验主要任务是使学生掌握研究与应用微生物的主要方法与技术，包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应于从事相关学科的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。提高学生分析问题和解决问题的能力。根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本特性，比较它们与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的问题点样分析，并加以解决。
二、 教学要求
与微生物学基础理论课紧密结合，使学生将理性知识与感性认识有机地结合，将书本知识用于实验，在实验中更深地理解基础理论，提高学生的综合能力与创新意识。
微生物学实验是生物学重要的基础课之一，特别是随着分子生物学的发展与拓宽，微生物学方法与技术显得尤为重要。此外，医学、农学、林学等学科，甚至地质学、太空学等也需微生物的方法与技术。本课程要求学生熟悉微生物学方法与技术，掌握无菌操作技能和建立无菌概念是微生物学实验中最重要的内容，重点掌握最基本的无菌操作技能，如接种、纯培养、计数等。
三、 课程内容与学时分配
本课程按每周3学时安排，全学时共54学时。在内容结构上既注意本课程内容的完整性，又注意协调好与其它专业后续课程的配合，充分利用有限的学时。
课程内容与学时分配表
内 容
| 学 时
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预备实验：显微镜（油镜）使用培训及考核
| 3
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实验一： 1.本学期教学计划安排及要求；2.环境微生物的检测；3.灭菌器皿的准备
| 3
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实验二： 1. 微生物菌落形态的观察；2. 细菌简单染色及个体形态的观察
| 3
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实验三：革兰氏染色(革兰氏阳性菌、阴性菌) 实验操作考核一
| 3
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实验四：细菌的鞭毛染色及其运动观察
| 3
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实验五：酵母菌死活染色及形态观察
| 3
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实验六：培养基的配制与灭菌
| 3
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实验七：神农架自然保护区土壤样品中微生物的分离
| 3
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实验八：放线菌的形态结构(玻璃纸法)
| 3
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实验九：几种常见霉菌形态结构的观察
| 3
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实验十：1.平板计数法；2.光电计数法；3.直接计数法(显微镜) 实验操作考核二
| 3
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实验十一：1. 淀粉水解试验；2. 糖发酵试验；3. IMViC试验
| 3
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实验十二：1. 化学因素对微生物生长的影响；2. 不同微生物对抗生素耐性的检测；3. 紫外线对细菌杀灭效果的检测 实验操作考核三
| 3
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实验十三：细菌质粒DNA转化(固体转化法)
| 3
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实验十四：环境水样微生物检测 1. 东湖水体中微生物的检测；2. 纯净水中微生物的检测；3. 自来水中微生物的检测；4. 饮料中细菌的检查
| 9
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实验十五：1. 实验问题解答；2. 本学期教学总结；3. 期末考试
| 3
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其中安排3次课堂实验才作考核。
预备实验 显微镜（油镜）使用培训及考核
[目的要求]
1、学习掌握油镜的规范使用方法；
2、复习掌握光学显微镜的基本结构及使用方法。
[实验原理]
油镜工作原理：
1、增加照明亮度；
2、显微镜的分辨力：指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。它与接物镜的数值孔径成正比，与光的波长成反比。
分辨力=
[实验内容]
1、复习显微镜的使用方法；
2、油镜的使用原理、操作要点（包括清洁方法）；
3、当堂考核油镜使用方法，合格方能通过。
[实验材料和用品]
学生显微镜、细菌三型装片；双层瓶(内装香柏油和乙醚——酒精擦拭液)、擦镜纸。
实验一 环境微生物的检测
[目的要求]
1、证明实验室环境与体表存在微生物；
2、比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型；
3、观察不同类群微生物的菌落形态特征；
4、体会无菌操作的重要性。
[实验原理]
平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在合宜温度下培养，1-2d内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。
[实验内容]
1、本学期教学计划安排及要求；
2、环境微生物的检测：倒平板、接种环境微生物；
3、灭菌器皿的准备：学习包扎平皿、移液管。
[实验材料和用品]
1、材料：环境中各种微生物；
2、用品：牛肉膏蛋白胨培养基、无菌平皿、移液管、平皿、酒精灯、牛皮纸、记号笔。
实验二 细菌简单染色与显微观察
[目的要求]
1、学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法；
2、初步认识细菌的个体形态、菌落形态特征；
3、巩固显微镜(油镜)的使用方法和无菌操作技术。
[实验原理]
简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷)，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。
[实验内容]
1、微生物菌落形态的观察：几种代表类型微生物菌落形态特征了解、辨识；
2、细菌简单染色及个体形态的观察：无菌接种操作；涂片、干燥、固定、染色、水洗、干燥、镜检。
[实验材料和用品]
1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、环境微生物检测平板；
2、用品：学生显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和乙醚——酒精擦拭液)、擦镜纸；吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)。
实验三 革兰氏染色
[目的要求]
1、学习并初步掌握革兰氏染色法；
2、了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
[实验原理]
革兰氏染色法是细菌学中最重要的鉴别染色法，是1884年由丹麦病理学家Christain Gram氏创立的，而后一些学者在此基础上作了某些改进。该染色法能将细菌分为G－菌和G＋菌，是基于这两类细菌的细胞壁结构和成分不同。G－菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G＋菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
[实验内容]
1、革兰氏染色法基本步骤：制片→初染→媒染→脱色→复染→镜检；
2、染色成败原因分析；
3、实验操作考核一。
[实验材料和用品]
1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌；
2、用品：学生显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和乙醚——酒精擦拭液)、擦镜纸；革兰氏染色液(结晶紫染液、卢戈氏碘液、95％乙醇、番红液)。
实验四 细菌的鞭毛染色及其运动观察
[目的要求]
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察细菌鞭毛的形态特征；
2、学习用压滴法观察细菌的运动性。
[实验原理]
鞭毛是细菌的运动“器官”，细菌是否具有鞭毛，以及鞭毛着生的位置和数目是细菌的一项重要形态特征。细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0.01～0.02微米，所以，除了很少数能形成鞭毛束(由许多根鞭毛构成)的细菌可以用相差显微镜直接观察到鞭毛束的存在外，一般细菌的鞭毛均不能用光学显微镜直接观察到，而只能用电子显微镜观察。要用普通光学显微镜观察细菌的鞭毛，必须用鞭毛染色法。
[实验内容]
1、硝酸银染色法染色；
2、压滴法观察细菌的运动性。
[实验材料和用品]
1、材料：变形杆菌；
2、用品：学生显微镜、酒精灯、载玻片、接种环、双层瓶(内装香柏油和乙醚——酒精擦拭液)、擦镜纸；鞭毛染色液(鞭毛染色液A、鞭毛染色液B)。
实验五 酵母菌死活染色及形态观察
[目的要求]
1、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。
2、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。
[实验原理]
酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍。美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的、而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞和活细胞进行鉴别。
[实验内容]
酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别。
[实验材料和用品]
1、材料：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；
2、用品：学生显微镜、酒精灯、载玻片、接种环；0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液。
实验六 培养基的配制与灭菌
[目的要求]
1、了解培养基的配制原理；
2、通过对基础培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤；
3、了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。
[实验原理]
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏，蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。
干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
[实验内容]
1、配制牛肉膏蛋白胨等培养基；
2、高压蒸汽灭菌方法灭菌。
[实验材料和用品]
1、试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂粉；
2、器具：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、移液管、高压蒸汽灭菌锅等。
实验七 神农架自然保护区土壤样品中微生物的分离
[目的要求]
1、了解土壤微生物数量测定的基本方法；
2、学习了解平板计数的基本操作技术。
[实验原理]
神龙架国家级自然保护区有着极其丰富的生物资源，保存了较为完好的原生和次生生物群落，是研究生物物种多样性、典型性以及植被自然演替规律的理想场所，也是本院本科生每年的实习基地之一。微生物资源是生物资源的重要组成部分之一，土壤是微生物生活最适宜的环境、它具有微生物生长所需要的营养物质和微生物进行生长繁殖及生存的各种条件，所以土壤中微生物的数量和种类都很多。
[实验内容]
1、土壤样品处理，制备10-1菌悬液；
2、制备适合细菌、放线菌、霉菌检测的平板；
3、选择合适的稀释度，稀释涂布，检测土壤中三类微生物的数目；
4、结合动植物等考察内容，有利于学生多角度认识生物多样性及生物之间及生物与环境之间的适应和谐关系。
[实验材料和用品]
1、材料：当年暑期采集的神龙架土壤样品（低温保存）；
2、用品：高氏一号培养基培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、豆芽汗葡萄糖培养基；无菌平皿及移液管、玻璃涂棒；4.5 mL/支分装好的无菌生理盐水、10%苯酚、80%乳酸等。
实验八 放线菌的形态结构观察（玻璃纸法）
[目的要求]
1、学习并掌握观察放线菌形态的基本方法；
2、初步了解放线菌的形态特征。
[实验原理]
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝(简称“基丝”)，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出气生菌丝(简称“气丝”)，并进一步分化产生孢子丝及孢子。为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持放线菌自然生长状态下的形态特征。本实验介绍其中几种常用方法，采用玻璃纸法观察。
[实验内容]
放线菌形态的观察（玻璃纸法）。
[实验材料和用品]
1、材料：细黄链霉菌或青色链霉菌；
2、用品：学生显微镜、体视镜、酒精灯、载玻片、镊子等。
实验九 霉菌的形态结构观察
[目的要求]
1、学习并掌握观察霉菌形态的基本方法；
2、初步了解霉菌的形态特征。
[实验原理]
霉菌可产生复杂分枝的菌丝体，分基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝体(尤其是繁殖菌丝)及孢子的形态特征是识别不同种类霉菌的重要依据。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多(约为3～10微米)，常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍显微镜即可观察。
[实验内容]
霉菌的观察（试管直接观察法）。
[实验材料和用品]
1、材料：黑曲霉、根霉；
2、用品：学生显微镜、体式镜、酒精灯、载玻片、镊子等。
实验十 微生物数量的测定
[目的要求]
1、学习平板菌落计数的基本原理和方法；
2、了解光电比浊计数法的原理，学习、掌握光电比浊计数法的操作方法；
3、了解血细胞计数板计数的原理，掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。
[实验原理]
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony -forming units, cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
当光线通过微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。在一定的范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比，而光密度或透光度可以由光电池精确测出。因此，可用一系列已知菌数的菌悬液测定光密度，作出光密度--菌数标准曲线。因此，对于不同微生物的菌悬液进行光电比浊计数应采用相同的菌株和培养条件制作标准曲线。
显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。
[实验内容]
1、平板计数法；
2、光电计数法；
3、直接计数法(显微镜)；
4、实验操作考核二。
[实验材料和用品]
1、材料：大肠杆菌；
2、用品：学生显微镜、血细胞计数板、计数器、分光光度计、盖玻片、无菌毛细滴管、无菌平皿、无菌试管、无菌移液管、酒精灯、涂棒、镊子、记号笔等；牛肉膏蛋白胨培养基、无菌生理盐水。
实验十一 微生物生理生化试验
[目的要求]
1、掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法；
2、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的重要作用，掌握通过糖发酵解释的方法；
3、了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。
[实验原理]
微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。胞外酶主要为水解酶，通过加水裂解大的物质为较小的化合物，使其能被运输至细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。
糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳等)；有些细菌只产酸不产气。例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；伤寒杆菌分解葡萄糖产酸不产气，不能分解乳糖；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。
IMViC是吲哚(Indol test)、甲基红(Methyl red test)、伏-普(Voges-Prokauer test)和柠酸盐(Citrate test)四个试验的缩写，i是在英文中为了发音方便而加上去的。这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，多用于水的细菌学检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中若超过一定数量，则表示受粪便污染。产气肠杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水样时要将两者分开。
[实验内容]
1、大分子物质的水解试验：淀粉水解试验；
2、糖发酵试验；
3、IMViC试验。
[实验材料和用品]
1、材料：大肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌、产气肠杆菌；
2、用品：酒精灯、接种环、记号笔等；糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基；试剂甲基红试剂、40％KOH、5％a一萘酚、乙醚、吲哚试剂等。
实验十二 环境因素对微生物生长的影响
[目的要求]
1、了解常用化学消毒剂对微生物的作用；
2、了解紫外线对微生物的作用；
3、了解抗生素对微生物的作用原理，学习抗菌谱试验的基本方法。
[实验原理]
常用化学消毒剂主要有重金属及其盐类、酚、醇、醛等有机溶剂、卤族元素及其化合物、染料和表面活性剂等。重金属离子可与菌体蛋白质结合而使之变性或与某些酶蛋白的巯基相结合而使酶失活；有机溶剂可使蛋白质及核酸变性，也可破坏细胞膜透性使内含物外溢；碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋白质失活，氯气与水发生反应产生的强氧化剂也具有杀菌作用；染料在低浓度条件下可抑制细菌生长。
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的。波长为200-300nm的紫外线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下，紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。另一方面，由于辐射能使空气中的氧电离成［O］，再使O2氧化生成自臭氧(O3)或使水(H2O)氧化生成过氧化氢(H2O2)。O3和H2O2均有杀菌作用。
生物之间的关系从总体上可分为互生、共生、寄生、拮抗等，微生物之间的拮抗现象是普遍存在于自然界的，许多微生物在其生命活动过程中能产生某种特殊代谢产物如抗生素，具有选择性地抑制或杀死其它微生物的作用，不同抗生素的抗菌谱是不同的，某些抗生素只对少数细菌有抗菌作用。
[实验内容]
1、化学因素对微生物的影响；
2、物理因素对微生物的影响；
3、生物因素对微生物的影响；
4、实验操作考核三。
[实验材料和用品]
1、材料：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌；
2、用品：酒精灯、接种环、记号笔、紫外灯等；牛肉膏蛋白胨平板；0.1%升汞、10%石炭酸、75%酒精、1%来苏尔、0.05%龙胆紫、氨苄青霉素。
实验十三 细菌质粒DNA转化(固体转化法)
[目的要求]
1、了解细菌水平基因转移、转化等基本概念及原理；
2、学习大肠杆菌固体转化方法。
[实验原理]
目前许多细菌可以建立自然感受态，能从环境中摄取DNA改变自身遗传结构，这种遗传物质在不同的生物个体之间交流的现象被称为水平基因转移，是微生物学研究中较为重要的一个问题，涉及生物演化、多样性、抗药性基因的扩散转移等诸多方面，具有重要的理论和实践意义。大肠杆菌除可以采用人工氯化钙液相转化外，在模拟环境条件的固相基质表面可以完成质粒转化。通过本实验项目学习，学生能了解掌握水平基因转移、自然遗传转化等概念，客观认识转基因技术的社会安全性问题，有利于激发学生的兴趣和主动探究的意识。
[实验内容]
1、制备固相转化的含钙平板；
2、对数生长中前期大肠杆菌培养液制备；
3、平板转化；
4、转化效率计算。
[实验材料和用品]
1、材料：大肠杆菌、质粒DNA；
2、用品：LB液体和固体培养基、无菌氯化钙溶液；摇床、离心机、无菌微量离心管、无菌移液管、酒精灯、接种环、记号笔等。
实验十四 环境水样微生物检测
[目的要求]
学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法；
[实验原理]
本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌总数。由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
[实验内容]
1、东湖水体中微生物的检测；
2、纯净水中微生物的检测；
3、自来水中微生物的检测；
4、饮料中细菌的检查。
[实验材料和用品]
1、材料：各种水样；
2、用品：无菌试管、无菌离心管、无菌移液管、无菌平皿、酒精灯、记号笔、离心机等；牛肉膏蛋白胨培养基。
四、教材与参考书（黑体五号）
教 材：沈萍、范秀容、李广武，《微生物学实验》（第三版），高等教育出版社，1999年
参考书：[1] 黄秀梨，《微生物学实验指导》，高等教育出版社，1999年
[2] 赵斌、何绍江，《微生物学实验》，科学出版社，2002
[3] 钱存柔、黄仪秀，《微生物学实验教程》，北京大学出版社，1999年
五、考核方式（黑体五号）
平时成绩70%，其中：
实验技能20%：平时实验操作检查、三次集中微生物操作基本技能考核；
实验报告45%：8次实验报告以及1次论文格式的开放实验报告；
综合素质5%：科学素养、卫生值日等；
期末考试30%，其中：
实验操作考核20%：抽查基本的微生物操作技能；
口试10%：抽签回答问题，涉及实验基本原理、操作要点、结果分析等。
